河南AJ真人生物科技有限公司
公司地址:鄭州市長興路與三全路交叉口省體育中心對麵


聯係人:張經理
電話:0371-65715725
Q Q:1097376464
Email:tianchishengwu@126.com

首頁 > 行業新聞 > 文章內容

細胞生物學實驗常用試劑、培養基的配製

作者:AJ真人生物 日期:2014-12-09 9:29:18 信息來源:/

一、動物細胞原代和傳代培養

(一)培養液的配製

蒸餾水必須是新鮮的三蒸水。選用RPMI 1640培養液。

1.配1升RPMI1640培養液的粉末(1袋)+2gNaHCO3

2.溶於800mL三蒸水中充分攪勻

3.用HCl調節PH7.2-7.4

4.用蒸餾水補足1L

5.用滅菌濾器過濾(用φ0.45或0.20μm濾膜)

6.用滅菌瓶分裝(學生實驗)100ml/瓶

(二)磷酸鹽緩衝液(PBS)的配製

pH
 7.6
 7.4
 7.2
 7.0
 
H2O

NaCl

Na2HPO4

NaH2PO4
 1000

8.5

2.2

0.1
 1000

8.5

2.2

0.2
 1000

8.5

2.2

0.3
 100mL

8.5g

2.2g

0.4g
(三)7.4% (W/V)  NaHCO3

(四)10000 IU / ml硫酸鏈黴素、青黴素G鉀鹽的配製

硫酸鏈黴素             1g

青黴素G鉀鹽     100萬 國際單位(IU)

將上述兩種藥品溶於100mL生理鹽水中,然後滅菌(過0.45μm的濾膜),分裝於青黴素瓶中放-20℃保存。使用時可按100 IU/mL稀釋。

(五)0.05%胰蛋白酶溶液的配製

1.      1g胰蛋白酶加入20mLPBS中

2.      37℃攪拌2小時

3.      4℃7000rpm離心20min 

4.      取上清滅菌(過0.45μm的濾膜)

5.      每10mL分裝,放-20℃保存

6.      取10mL凍存的加入滅菌的PBS1L中,2%的EDTA(滅過菌的)10mL

7.      配成終濃度0.05%的胰蛋白酶

(六)0.3%台盼蘭染液

      稱取台盼蘭(Trypan blue)粉0.3克,溶於100mL生理鹽水中,加熱使之完全溶解,用濾紙過濾除渣,裝入瓶內室溫保存。

(七)洗液

方法:先將重鉻酸鉀完全溶解於水中,如不溶可加熱幫助溶解,然後緩慢加入濃硫酸。加濃硫酸時將產生大量熱量,因此配製的容器宜用陶瓷,加入濃硫酸時要緩慢而不能過急,以免熱量產生太多,導致容器破裂,發生危險。

次強液:重鉻酸鉀120g           強液: 重鉻酸鉀63g

               濃硫酸 200mL                    濃硫酸1000mL

               蒸餾水1000mL                   蒸餾水 200mL

 

二、脂類染色

10%中性福爾馬林      甲醛      100mL     磷酸二氫鈉    6.5g

                                           蒸餾水  900mL

蘇丹Ⅲ染液               蘇丹Ⅲ  0.1g       95%酒精       20mL

蘇丹黑染液               蘇丹黑  0.5g       70%酒精      100mL
 

三、石蠟切片

      卡諾氏固定液            100%酒精  3份     冰醋酸  1份

      埃利希蘇木精染液    蘇木精      1.0g       乙醇       50mL  

                                          醋酸          5mL       甘油       50mL

                                          硫酸鋁鉀  5g           蒸餾水   50mL

      將蘇木精溶於15mL的乙醇中,再加醋酸並攪拌,以加速其溶解。當蘇木精溶解後將甘油加入並搖動容器,同時加入其餘的乙醇;硫酸鋁鉀需研磨並加熱,然後溶解於蒸餾水中,將其一滴滴地加入上邊的溶液,並不斷搖動,此液配好後,將瓶口用紗布蓋好,置通風處,經常搖動以加速其成熟,成熟約需4周左右,成熟的染液為深紅色。

      1%伊紅酒精溶液      伊紅      1.0g      95%酒精    100mL

      1%鹽酸酒精溶液      鹽酸      1 份      70%酒精     100份

      郝普特氏粘片劑     明膠      1.0g      蒸餾水         100mL

                                          石炭酸   2.0g      甘油             15mL

      配製時明膠溶解於30℃的蒸餾水中(水浴鍋中進行),溶解後加入石炭酸和甘油,攪拌均勻過濾,貯存於玻璃瓶中.

1%番紅染液         番紅     1.0g       蒸餾水  100mL

1%固綠染液       固綠     1.0g       蒸餾水  100mL

 

四、PAS反應

      1%過碘酸                   過碘酸   1.0g        蒸餾水  100mL

      1 mol/L(V/V)HCl            濃鹽酸   8.5mL     蒸餾水  91.5mL

0.5%偏重亞硫酸鈉溶液   偏重亞硫酸鈉  0.5g  蒸餾水  100mL

      Schiff試劑          蒸餾水100mL煮沸後取下,立即放入堿性品紅1g使之溶解。冷卻至50℃時用濾紙過濾。加偏重亞硫酸納(或鉀)(或亞硫酸氫鹽)2g及1mol/L HCl 20mL。避光放置18~24h(室溫)。溶液變為草黃色。然後加入300mg活性炭,用力搖動1min,過濾。過濾後即得無色品紅。

     此液配就後,封嚴瓶塞,外包黑紙,貯於4℃冰箱備用,用前升至室溫。

 

五、核酸的細胞化學(Feulgen反應)

     1mol/LHCl          濃鹽酸   8.5mL     蒸餾水  91.5mL

      1%亮綠染液        亮綠       1g             蒸餾水  100mL

      Schiff試劑         蒸餾水100mL煮沸後取下,立即放入堿性品紅1g使之溶解。冷卻至50℃時用濾紙過濾。加偏重亞硫酸納(或鉀)(或亞硫酸氫鹽)2g及1mol/L HCl 20mL。避光放置18~24h(室溫)。溶液變為草黃色。然後加入300mg活性炭,用力搖動1min,過濾。過濾後即得無色品紅。

      此液配就後,封嚴瓶塞,外包黑紙,貯於4℃冰箱備用,用前升至室溫。
 

六、液泡係及線粒體的活體染色

Ringer溶液          氯化鈉             0.85g(變溫動物用0.65g)

                                氯化鉀             0.25g

                                 氯化鈣             0.03g

                                蒸餾水             100mL

1%的1/5000詹姆斯綠B溶液稱取50mg詹姆斯綠B溶於50mLRinger溶液混勻,稍加 熱(30~40℃)使之溶解,用濾紙過濾,即為1%原液。取1%原液1mL加入49mLRinger溶液,即成1/5000工作液。將其裝入瓶中備用 。最好現用現配 ,以保持  它的充分氧化能力。

1%的1/3000中性紅溶液    稱取0.5g中性紅溶液溶於50mLRinger液,稍加熱(30~40℃)使之很快溶解,用濾紙過濾,裝入棕色瓶於暗處保存。臨用前,取已配製的1%中性紅溶液1mL加入29mLRinger溶液混勻,裝入棕色瓶備用。

 

七、細胞融合

Alsever溶液:       葡萄糖2.05g,檸檬酸鈉0.80g,NaCl 0.42g,

                                     溶於100mL雙蒸水中。

GKN溶液:           NaCl 8g,KCl 0.4g,Na2HPO4·2H2O 1.77g,

                                      NaH2PO4·H2O 0.69g,葡萄糖2g,酚紅0.01g,

                                     溶於1000mL水中。

50%PEG溶液:    稱取一定量的PEG(WM=4000)放入燒杯中,沸水浴加熱,使之熔化,待冷卻至50℃時,加入等體積預熱至50℃的GKN溶液,混勻,置37℃備用。

 

本文地址:/bnews/469.html