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影響ELISA試驗效果常見問題原因分析及解決辦法

作者:AJ真人生物 日期:2013-09-30 10:16:02 信息來源:/

影響ELISA試驗效果常見問題原因分析及解決辦法

  ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結於下,以期給同行帶來一些啟發,提高試驗質量。

操作步驟

可能原因

解決辦法

選擇試劑

選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鍾。

加樣

1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
2.手工操作中,加樣板過多造成加樣後放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時);
3.加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。

1.標本為血清:最好將血液先自然存放1-2小時後,再用3000rmp離心15分鍾;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血後必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間後,3000rpm離心15分鍾;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置於-20℃的低溫冰箱內。
2.加樣後及時放入孵箱。
3.加酶試劑後用吸水紙在酶標板表麵輕拭吸幹。
4.如果采用AT或其他全自動加樣,最好選擇FAME或其他後處理儀器加酶試劑。
5.標本較多時,請分批操作。

孵育

1.孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附於孔壁,難於清洗徹底;
2.孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附於反應孔周圍,難以清洗徹底。

1.貼封片或加蓋;
2.按說明步驟嚴格控製操作時間。

洗板

1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
2.采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不徹底;洗板針堵塞,抽吸不完全;洗板不暢,導致洗板效果差。
3.反應板過多造成洗板等待時間長。

1.保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板後最好在吸水紙(選擇幹淨、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍幹;
2.合理安排,或多用幾台洗板機。

顯色

1. 顯色劑配製後放置時間過長或使用過期顯色劑;
2. 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。

1. 顯色劑盡量在臨用前配製,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用;
2. 加樣時保持顯色劑不外流;
3.A、B液應避免接觸金屬器械。

終止

加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。

加終止液時應避免產生氣泡。

讀板

讀板時板底不清潔。

應保證酶標板清潔。

全過程

1.整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸;
2.實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。

    在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對於實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。

 

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